Problematic issues in the isolation of adipose-derived mesenchymal stromal cells: new methodological aspects (pilot research)

Abstract

The aim is to identify and discuss the key problems associated with the isolation of adipose-derived mesenchymal stromal cells, as well as the experimental search for potential solutions to overcome these obstacles for the optimization of the isolation methodology. Materials and methods. A literature review was conducted using PubMed and Google Scholar, selecting key publications on isolation methods, MSCs characteristics, and good manufacturing practice (GMP) principles. Inclusion criteria: full-text articles on adipose MSCs isolation, comparison of enzymatic methods of isolation, GMP standardization, and cell characteristics. Following this, a pilot study was conducted using lipoaspirate and fragments of subcutaneous adipose tissue (SAT) with the patients’ consent. Processing in Zaporizhzhia State Medical and Pharmaceutical University’s GMP-compliant lab: mechanical grinding (for SAT), DPBS washing with antibiotics, enzymatic digestion (collagenase or trypsin) at 37 °C, 600 g centrifugation, filtration, DMEM / FBS cultivation. Viability was assessed in Goryaev chamber with trypan blue; passaging at 60–70 % confluency. Мета роботи – виявлення та обговорення ключових проблем, пов’язаних із виділенням мезенхімальних стромальних клітин із жирової тканини, а також експериментальний пошук потенційних рішень для подолання цих перешкод для оптимізації методології виділення. Матеріали і методи. Здійснили комплексний огляд наукової літератури, що індексується в базах PubMed і Google Scholar. Обирали ключові публікації щодо методів виділення, характеристик МСК і принципів належної виробничої практики (GMP). До аналізу залучали повнотекстові статті щодо виділення МСК із жирової тканини, порівняння ензиматичних методів, стандартизації протоколів (GMP) і характеристики клітин. Після цього здійснили пілотне дослідження з використанням ліпоаспірату та фрагментів підшкірної жирової тканини за згодою пацієнтів. Обробка, яку здійснили в лабораторії Запорізького державного ме- дико-фармацевтичного університету, що відповідає вимогам GMP: механічне подрібнення, промивання в DPBS з антибіотиками, ензиматична дигестія (колагеназа або трипсин) при 37 °C, центрифугування (600 g), фільтрація, культивування в DMEM із FBS. Життєздатність оцінювали в камері Горяєва з трипановим синім; пасажування при 60–70 % конфлюентності.