Розробка та валідація методик контролю якості активного фармацевтичного інгредієнта та готових лікарських форм енісаміуму йодиду

Abstract

Дисертація присвячена розробці та валідації методик контролю якості активного фармацевтичного інгредієнта та готових лікарських форм енісаміуму йодиду. На основі аналізу доступних даних літератури щодо контролю якості АФІ енісаміуму йодиду та його ГЛФ зроблено висновок, що методики контролю недостатньо описані. Наявні методики не можна кваліфікувати такими, що відповідають рекомендаціям Міжнародної конференції з гармонізації технічних вимог до реєстрації лікарських препаратів для людини (ICH). У зв’язку з цим в рамках виконання дисертаційної роботи було посталено завдання: розробити та провести валідацію методик контролю якості АФІ та ГЛФ за основними показниками якості з підходами ICH. Розроблено методику контролю якості супровідних домішок АФІ. При розробці методики контролю супровідних домішок було взято до уваги схему синтезу енісаміуму йодиду та результати стресових випробувань. Визначено перелік потенційних супровідних домішок енісаміуму йодиду, до якого належать бензиламін, ізонікотинова кислота та бензиламід ізонікотинової кислоти. На основі рекомендацій ICH розраховано цільові ліміти детектування та ліміти кількісного визначення домішок. Враховуючи необхідність контролю домішок на рівні «не більше 0,05 % кожної домішки», було застосовано метод високоефективної рідинної хроматографії. Для можливості забезпечення хроматографічного розділення піків домішок та піків основного компонента було застосовано йон-парний реагент натрію октансульфонат. Хроматографічну колонку з сорбентом силікагель модифікований октадецильними групами, розміром 150 мм х 4,6 мм, з розміром часток 5 мкм, визначено як оптимальну. Для можливості встановлення довжини хвилі детектування досліджено максимуми поглинання кожної домішки із використанням УФ спектрофотометрії. Встановлено дві хвилі детектування: 205 нм (для визначення бензиламіну, бензиламіду ізонікотинової кислоти та неідентифікованих домішок) та 265 нм (для визначення ізонікотинової кислоти). Оптимальне значення рН буферного розчину становило 2,5. При зниженні рН погіршувалося розділення піка бензиламіду ізонікотинової кислоти з піком органічної частини енісаміуму йодиду, а при підвищенні рН погіршувалося розділення піка ізонікотинової кислоти з піком йодид-йону. Ацетонітрил вибрано як органічну частину рухомої фази. Оптимізовано концентрацію випробовуваного розчину, з урахуванням необхідності високої чутливості методики та збереження достатніх характеристик піків домішок та піків основного компонента. Підтверджено, що концентрація 0,4 мг/мл енісаміуму йодиду в рухомій фазі є оптимальною. Проведено стресові дослідження із застосуванням таких факторів впливу: температура, перекис водню, хлористоводнева кислота, натрію гідроксид, світло. Визначено, що основними можливими домішками є бензиламін та ізонікотинова кислота. В умовах стресових випробувань підтверджено специфічність аналітичної методики. Встановлено вимоги до хроматографічної системи за такими характеристиками як симетрія піка, число теоретичних тарілок, співвідношення пік/западина, відносне стандартне відхилення. Проведено валідацію методики контролю супровідних домішок. Встановлені ЛД та ЛКВ ідентифікованих та неідентифікованих домішок. Підтверджено такі валідаційні характеристики як специфічність, правильність, прецизійність, діапазон застосування, робасність, внутрішньо-лабораторна прецизійність. Підтверджена лінійність в діапазоні концентрацій 0,01 – 0,06 % для кожної домішки. Коефіцієнт кореляції лінійної залежності сигналу від концентрації (r) між введеними та знайденими значеннями для кожної із визначуваних домішок становив більше 0,990, а відносні довірчі інтервали (Δz) знаходилися на рівні не більше 5,0 %. Підтверджена стабільність випробовуваного розчину, розчину порівняння та розчину для перевірки придатності хроматографічної системи при їх зберіганні за кімнатної температури протягом 48 год. The dissertation is devoted to the development and validation of methods for quality control of the active pharmaceutical ingredient (API) and the finished dosage forms (FDF) of enisamium iodide. In virtue of the analysis of available literature data regarding the quality control of the API enisamium iodide and its FDF, it was concluded that the control methods are not sufficiently described. The available methods cannot be qualified as such which are in compliance with the recommendations of the International Conference on Harmonization of Technical Requirements for the Registration of Medicinal Products for Human Use (ICH). In this regard, in the framework of the implementation of the dissertation, the task was follow: develop and validate the methods of quality control of API and FDF by the main quality attributes with the ICH approaches. The method of quality control of the related substances of the API has been developed. During the development of the method of control of the related substances the synthesis chart, as well as the results of the forced degradation study were taken into account. The list of potential impurities of enisamium iodide, which includes benzylamine, isonicotinic acid and isonicotinic acid benzylamide, was defined. Based on ICH recommendations, target detection limits and limits for quantitative determination of impurities were concluded. Taking into account the necessity the control of impurities at the level of «not more than 0.05 % of each impurity», the method of the high-performance liquid chromatography (HPLC) was used. For the possibility of providing a chromatographic separation of peaks of impurities and peaks of the main component, an ion-pair reagent sodium octanesulfonate was used. Chromatographic column with sorbent silica gel modified by octadecyl groups, 150 mm x 4.6 mm in size with a particles size of 5 μm was estimated as optimal. To establish the wavelength of the detection, maxima of absorption of each impurity using UV spectrophotometry were investigated. Two waves of detection have been introduced: 205 nm (for the determination of benzylamine, isonicotinic acid benzylamide and unidentified impurities) and 265 nm (for determination of isonicotinic acid). The optimum pH value of the buffer solution was with pH 2.5. In a case of reducing of pH, the separation of the peak of isonicotinic acid benzylamide with the peak of the organic part of the enisamium iodide was impaired. In a case of increasing of pH value, the separation of the peak of the isonicotinic acid with the iodine ion peak was impaired. Acetonitrile was chosen as an organic part of the mobile phase. The concentration of the test solution was optimized. It was taken into account the necessity the high sensitivity of the method and maintaining sufficient characteristics of the peaks of impurities and peaks of the main component. It has been confirmed that the concentration of 0.4 mg per ml of enisamium iodide in the mobile phase was optimal. The forced degradation studies have been conducted. The follow exposure factors were used: temperature, hydrogen peroxide, hydrochloric acid, sodium hydroxide, light. It has been determined that the main possible impurities were benzylamine and isonicotinic acid. In the conditions of forced degradation study the specificity of the analytical method was confirmed. The requirements for a chromatographic system by such characteristics as symmetry peak, number of theoretical plates, peak valley ratio, and relative standard deviation were established. The validation of the method of related substances control was performed. Detection limits as well as limits of quantification of identified and unidentified impurities have been counted. Specificity, accuracy, precision, range of use, robustness, intermediate precision of analytical method has been confirmed. The linearity for each impurity is approved in the range of concentrations 0.01–0.06 %. The correlation coefficients of linear regression (r) between the entered and found values for each of the determined impurities were greater than 0.990. The levels «not more than 5.0 %» of Δz (relative confidence intervals) were assigned. Stability of the solutions have been confirmed (during storage at room temperature for 48 hours).