Характеристика стану вродженої ланки місцевого імунітету тканин пародонту щурів після екстракції зубу на фоні цукрового діабету за показниками експресії CD 68

Abstract

Традиційно CD 68 використовується у якості високоспецифічного цитохімічного маркеру для імунного фарбування моноцитів/макрофагів при гістохімічному аналізі тканин із запаленням, або пухлинним процесом. Тому метою дослідження було визначити особливості стану вродженої ланки місцевого імунітету тканин пародонту за показниками експресії CD68 в тканинах пародонту щурів із експериментальним стрептозотоциновим діабетом на 1-у, 7-му та 14-ту добу після екстракції першого нижнього моляру. Матеріали та методи дослідження. Дослідження були проведені на 120 щурах-самцях лінії Вістар, віком 8-10 місяців, розподілених на 8 груп по 15 тварин у кожній, а саме чотири контрольні «Контроль-0» ˗ екстракція зубу не проводилась; «Контроль-1; -7 та -14» групи щурів на 1-шу, 7-у та 14-у доби після екстракційного періоду; та 4 із експериментальним цукровим діабетом (моделювали введенням внутрішньоочеревинно стрептозотоцину (SIGMA Chemical, США) в дозі 50 мг/кг), на 21-у добу середній рівень глікемії у групах становив 22,65±0,88 мМ/л. Екстракцію зубу проводили під тіопенталовим наркозом (доза 40 мг/кг) з додатковою місцевою інфільтраційною анестезією препаратом «Убістезин» (3М Дойчланд ГмбХ, Німеччина). Для дослідження показників експресії CD68 депарафіновані та регідратовані зрізи пародонту інкубували з моноклональними антитілами із первинними кролячими IgG до CD68 (Santa Cruz Biotechnology, USA) у розведені 1:200 та вторинними мишачими IgG до повної молекули IgG кроля, кон’югованими з FITC (Santa Cruz Biotechnology, USA) у розведенні 1:200. Результати дослідження. Екстракція зубу щурам із нормальними показниками вуглеводного обміну призводить до розвитку класичного запального процесу, формуванню на 7 добу макрофагальної інфільтрації м'яких тканин пародонту та «затуханням» запалення після другого тижня. Експериментальний цукровий діабет сприяє формуванню «прихованого» запального процесу із розповсюдженою макрофагальною інфільтрацією м’яких тканин пародонту. На цьому фоні екстракція зубу незначно збільшує експресію CD 68, процес відбувається повільно та характеризується пролонгацією у віддаленому періоді. Традиционно CD 68 используется в качестве высоко специфического цитохимического маркера для иммунного окрашивания моноцитов/макрофагов при гистохимическом анализе тканей с воспалением или опухолевым процессом. Поэтому целью исследования было определить особенности состояния врожденного звена местного иммунитета тканей пародонта по показателям экспрессии CD68 в тканях пародонта крыс с экспериментальным стрептозотоциновым диабетом на 1-е, 7-е и 14-е сутки после экстракции первого нижнего моляра. Материалы и методы исследования. Исследования были проведены на 120 крысах-самцах линии Вистар в возрасте 8-10 месяцев, распределенных на 8 групп по 15 животных в каждой, а именно четыре контрольных «Контроль-0» ˗ экстракция зуба не проводилась; «Контроль-1; -7 и -14 »группы крыс на 1-е, 7-е и 14-е сутки после экстракционного периода; и четыре соответствующие группы с экспериментальным сахарным диабетом (моделировали введением внутрибрюшинно стрептозотоцина (SIGMA Chemical, США) в дозе 50 мг/кг), на 21-е сутки диабета средний уровень гликемии в группах составил 22,65±0,88 мМ/л. Экстракцию зуба проводили под тиопенталовым наркозом (доза 40 мг/кг) с дополнительной местной инфильтрационной анестезией препаратом «Убистезин» (3М Дойчланд ГмбХ, Германия). Для исследования показателей экспрессии CD68 депарафинированные и регидратированные срезы пародонта инкубировали с первичными моноклональными антителами кроля IgG к CD68 (Santa Cruz Biotechnology, USA) в разведении 1:200 и вторичными мышиными IgG к полной молекуле IgG кроля, конъюгированными с FITC (Santa Cruz Biotechnology, USA) в разведении 1:200. Результаты исследования. Экстракция зуба крысам с нормальными показателями углеводного обмена приводит к развитию классического воспалительного процесса, формированию на 7 сутки макрофагальной инфильтрации мягких тканей пародонта и «затуханием» воспаления после второй недели. Экспериментальный сахарный диабет способствует формированию «скрытого» воспалительного процесса с распространенной макрофагальной инфильтрацией мягких тканей пародонта. На этом фоне экстракция зуба незначительно увеличивает экспрессию CD 68, процесс медленно прогрессирует, но характеризуется пролонгацией в отдаленном периоде. CD 68 is conventionally used as a highly specific cytochemical marker for monocytes / macrophages immune staining during histochemical analysis of tissues with suspected inflammatory or timorous process. Therefore, the aim of this study was to evaluate the peculiarities of the status of an innate component of local immunity in the periodontium tissues by using CD68 expression indices in rats with modelled streptozotocininduced diabetes on the 1st, 7th and 14th days after extraction of the first lower molar. Materials and methods. Research was conducted on 120 Wistar male rats aged 8-10 months, divided into 8 groups of 15 animals in each. There were four control groups "Control-0", for which no tooth extraction was performed on; “Control-1; -7 and -14" groups involved the rats, whose parameters were registered on the 1st, 7th and 14th day after the extraction; and four relevant groups with modelled diabetes mellitus (simulated by intraperitoneal introduction of streptozotocin (SIGMA Chemical, the USA) in a dose of 50 mg/kg), on the 21st day of diabetes, the average glycemic level in the groups was 22.65 ± 0.88 mM/L. The tooth extraction was performed under thiopental anaesthesia (in a dose 40 mg / kg) with additional local infiltration anaesthesia using "Ubisthesin" (3M Deutschland GmbH, Germany). In order to study CD68 expression indices, dewaxed and rehydrated periodontium cross sections were incubated with the monoclonal antibodies: primary rabbit IgG to CD68 (Santa Cruz Biotechnology, the USA) using 1:200 dilution and secondary mouse IgG to the complete molecule of rabbit IgG conjugated with FITC (Santa Cruz Bioteology) using 1:200 dilution. Results. The tooth extraction in rats with normal values of carbohydrate metabolism leads to the development of inflammation, macrophage infiltration in periodontal soft tissues on the 7th day, and inflammation "fading" following the second week. Modelled diabetes mellitus contributes to the formation of a “hidden” inflammation with the extended macrophage infiltration in the periodontal soft tissues. Thus, in diabetes mellitus, the tooth extraction slightly increases the expression of CD 68, the process slowly progresses, but is characterized by prolongation in the long-term period.