Лінійні відмінності патерну експресії нейрональної NO-синтази у структурі блакитної плями стовбура мозку щурів

Abstract

Мета роботи – встановити лінійні відмінності експресії нейрональної NO-синтази (nNOS), особливості її розподілу в судинному та клітинному компартментах блакитної плями стовбура мозку у щурів-самців ліній Wistar і SHR. Матеріали та методи. Дослідження здійснили на 10 щурах (самцях) лінії Wistar і 10 щурах (самцях) лінії SHR масою 250–270 г . Об’єктом дослідження був довгастий мозок. Для вивчення патерну експресії nNOS у клітинному і судинному компартментах блакитної плями стовбура мозку використовували імунофлуоресцентний метод її ідентифікації в серійних гістологічних зрізах.Встановили, що експресія nNOS у структурі блакитної плями стовбура мозку істотно відрізняється в щурів різних ліній; характеризується компартменталізацією на два відділи – тканинний (нейрони та гліальні клітини) й судинний (ендотеліоцити та еритроцити). У щурів лінії SHR встановили збільшення концентрації ферменту в тканинному компартменті більш ніж у 2 рази (р<0,05), перевищення площі імунореактивності в судинному компартменті в 1,8 раза (р<0,05), а концентрації – на 7% (р<0,05), порівнюючи з відповідними показниками у щурів лінії Wistar. Цель работы – установить линейные различия экспрессии нейрональной NO-синтазы (nNOS), особенностей её распределения в сосудистом и клеточном компартментах голубого пятна ствола мозга у крыс-самцов линий Wistar и SHR. Материалы и методы. Исследование провели на 10 крысах (самцах) линии Wistar та 10 крысах (самках) линии SHR массой 250–270 г . Объектом исследования был продолговатый мозг . Для изучения паттерна экспрессии nNOS в клеточном и сосудистом компартментах голубого пятна ствола мозга использовали иммунофлюоресцентный метод её идентификации в серийных гистологических срезах. Установлено, что экспрессия nNOS в структуре голубого пятна ствола мозга существенно отличается у крыс разных линий; характеризуется компартментализацией на два отдела – тканевый (нейроны и глиальные клетки) и сосудистый (эндотелиоциты и эритроциты). У крыс линии SHR установлено увеличение концентрации фермента в тканевом компартменте более чем в 2 раза (р<0,05), превышение площади иммунореактивности в сосудистом компартменте в 1,8 раза (р<0,05), а концентрации – на 7% (р<0,05) по сравнению с соответствующими показателями у крыс линии Wistar. The aim of the research was to establish linear differences of nNOS expression pattern, peculiarities of its distribution in vascular and cellular compartment of locus coeruleus in the brainstem of Wistar and SHR rats. Methods and results. The research was carried out on 10 Wistar male rats and 10 male SHR rats with body mass 250-270 g. Decapitation was done under anesthesia (sodium ethaminalum 40 mg/kg intraperitoneally). Identification of locus coeruleus neurons was done with the help of stereotactic atlas of rat’s brain. nNOS expression in the serial brainstem histological sections was studied with immunocytofl uorescent method. Histological sections were incubated with primary rabbit IgG to rats’ nNOS (Sigma Chemical, USA). Then secondary mice IgG to rabbit IgG conjugated with FITC (Sigma Chemical, USA). 1:64 dilution were applied. Package of statistical programs VIDAS-2.5 (Kontron Elektronik, Germany) іn EXCEL 7.0 (Microsoft Corp., USA) was used for analysis. Data with p<0,05 were taken as reliable. Conclusion. The results of the research demonstrated heterogeneity of nNOS distribution in rat’s brain stem locus coeruleus. Expression pattern of nNOS in locus coeruleus is characterized by compartmentalisation into two sections: cellular (neurons and glial cells) and vascular (endothelial cells and erythrocytes). Wistar and SHR rats have linear differences in nNOS expression. It is characterized by increased concentration of the enzyme in cellular compartment in two times more (р<0.05) in SHR rats. At the same time in vascular compartment in SHR rats the increase immunoreactive area in 1.8 times more (р<0.05), and by 7% (р<0.05) concentration in comparison with appropriate indices in Wistar rats.