Вплив пренатальної хронічної гіперглікемії на патерн експресії ізоформ NOS у міокарді лівого шлуночка серця щурів-самців препубертатного віку

Abstract

Мета роботи – встановити особливості патерну експресії ізоформ NOS у поздовжньому та поперечному шарах міокарда лівого шлуночка серця щурів-самців (вік – 3 місяці), нащадків самиць із експериментальним гестаційним діабетом (ЕГД). Матеріали та методи. Дослідження здійснили на 10 самцях щурів, нащадків самиць із нормальною вагітністю, та 10 нащадках самиць з ЕГД. Для аналізу стану системи монооксиду азоту в гістологічних зрізах міокарда окремо в поздовжньому та поперечному шарах досліджували експресію нейрональної, індуцибельної та ендотеліальної ізоформ синтази оксиду азоту (Nos ). Для аналізу патерну експресії ізоформ ферменту NOS у 5 мкм гістологічних зрізах міокарда лівого шлуночка серця виконали комплекс імуноцитохімічних досліджень. Гістологічні зрізи розподіляли на 3 групи: першу групу зрізів інкубували з кролячими IgG до нейрональної синтази оксиду азоту (nNos) (Santa Cruz Biotechnology, USA) у розведенні 1:200; другу групу зрізів інкубували з кролячими IgG до ендотеліальної синтази оксиду азоту (eNos) (Santa Cruz Biotechnology, USA) у розведенні 1:200; третю групу зрізів інкубували з мишачими IgG до індуцибельної синтази оксиду азоту (iNos), кон’югованої з FITC (Santa Cruz Biotechnology, USA), у розведенні 1:200. Аналіз зображення здійснили за допомогою пакета прикладних программ VIDAS-2.5 (Kontron Elektronik, ФРН). Мікрозображення міокарда лівого шлуночку, які отримано на мікроскопі AXIOSKOP, через високочутливу відеокамеру COHU 4922 (COHU Inc., США) вводилося в комп’ютерну систему цифрового аналізу зображення VIDAS-386 (Kontron Elektronik, ФРН).Результати. Під час дослідження встановлено, що пренатальна гіперглікемія призводить до суттєвих змін експресії ізоформ NOS у міокарді лівого шлуночка у 3-місячних нащадків самок з ЕГД, при цьому вміст і розподіл ензимів залежить від типу ферменту та його локалізації в м’язових шарах. Для еNOS притаманно підвищення експресії та розподілу в обох шарах міокарда лівого шлуночку, для nNOS та іNOS навпаки характерним є зниження експресії ферменту в поперечних м’язах міокарда із підвищенням її в поздовжньому шарі. Висновки. Порушення гомеостазу глюкози у плода в останньому триместрі вагітності змінює співвідношення патернів експресії ізоформ NOS у міокарді лівого шлуночку та порушує їхній баланс в окремих шарах, що, ймовірно, може стати причиною формування серцево-судинної патології у зрілому віці. The aim of our study was to find out the features of the nitric oxide synthase (NOS) isoforms expression in longitudinal and transversal layers of the myocardium of the left ventricle in male rats of 3 months, which are descendants of female rats with experimental gestational diabetes (EGD). Materials and methods. Study was carried out on 10 male rats descendants of female rats with normal course of pregnancy and 10 descendants of female rats with EGD. We evaluated the expression of neuronal, endothelial and inducible isoforms of NOS in histological sections both of transversal and longitudinal layers of the myocardium of left ventricle. With the aim to analyze the pattern of the NOS isoforms expression in 5 um histological slices of left ventricle myocardium we have carried out a complex of histochemical assays. Slices were allocated to 3 groups: 1st one was incubated with rabbit IgG to neuronal NOS (Santa Cruz Biotechnology, USA) in dilution of 1:200; 2nd group underwent the incubation with rabbit IgG to endothelial NOS (eNos) (Santa Cruz Biotechnology, USA) in dilution 1:200; 3rd group was incubated with mice IgG to inducible NOS (iNos) conjugated with FITC (Santa Cruz Biotechnology, USA) in dilution of 1:200. The analysis of images was carried out with VIDAS-2.5 application package (Kontron Elektronik, Germany). Microimages of the left ventricle myocardium obtained with AxioScope (Carl Zeiss, Germany) and COHU 4922 (COHU Inc., USA) camera were processed in the system of digital image analysis VIDAS-386 (Kontron Elektronik, Germany). Results. In the study we have found that prenatal hyperglycaemia leads to the significant changes of the expression of NOS isoforms in the myocardium of left ventricle in male rats descendants of females with EGD, and the contain and the allocation of these enzymes are dependent both on type of the enzyme and its location in muscular layers. For eNOS the increase of the expression and the allocation in both transversal and longitudinal layers was typical, and for nNOS and iNOS we have found the significant decrease of the expression in transversal layers and the significant increase in longitudinal layers. Conclusion.We believe, the glucose homeostasis violation in foetus during the last trimester of the pregnancy changes the ratio of the NOS isoforms expression in the left ventricle myocardium and affects the balance of them in different layers, which could be a reason of the cardiovascular pathology development in adulthood.